Penderfynu ar nifer y micro-organebau - dull cyfrif uniongyrchol y microsgop!
Mae twf poblogaeth bacteriol yn cael ei amlygu gan gynnydd yn nifer y celloedd neu gynnydd mewn màs cellog. Mae'r dulliau ar gyfer pennu nifer y celloedd yn cynnwys dull cyfrif microsgop uniongyrchol, dull cyfrif cytref plât, dull cymhareb olew ffotodrydanol, dull tebygolrwydd uchaf, a dull hidlo pilen. Mae'r dulliau o fesur mater cell yn cynnwys pennu pwysau sych celloedd, pennu rhai cydrannau cellog megis nitrogen, RNA a chynnwys DNA, a phennu metabolion. Yn fyr, mae yna lawer o ddulliau ar gyfer mesur twf micro-organebau, pob un â'i fanteision a'i anfanteision ei hun, a dylid eu dewis yn ôl y sefyllfa benodol. Mae'r arbrawf hwn yn bennaf yn cyflwyno'r dull cyfrif uniongyrchol microsgop a ddefnyddir yn gyffredin mewn cynhyrchu ac ymchwil wyddonol.
1. Gofynion Pwrpas
1. Egluro egwyddor cyfrif celloedd gwaed.
2. Meistroli'r dull o gyfrif micro-organebau gan ddefnyddio cownter celloedd gwaed.
2. Egwyddorion sylfaenol
Mae dull cyfrif uniongyrchol microsgop yn ddull syml, cyflym a greddfol i gyfrif yn uniongyrchol ychydig bach o ataliad y sampl i'w brofi ar sleid gwydr arbennig gydag arwynebedd a chyfaint penodol (a elwir hefyd yn gownter bacteria). Dulliau. Ar hyn o bryd, y cownteri bacteria a ddefnyddir yn gyffredin gartref a thramor yw: bwrdd cyfrif celloedd gwaed, cownter bacteria Peteroff-Hauser a chownter bacteria Hawksley, ac ati Gellir eu defnyddio ar gyfer cyfrif burum, bacteria, sborau llwydni ac ataliadau eraill, a mae'r egwyddor sylfaenol yr un peth. Mae gan y ddau fath olaf o gownteri bacteria gyfanswm cyfaint o 0.02mm3 ar ôl cael eu gorchuddio â gwydr gorchudd, a dim ond 0.02mm yw'r pellter rhwng y gwydr gorchudd a'r sleid, felly mae'r olew gellir defnyddio lens amcan trochi i arsylwi ac arsylwi celloedd bach fel bacteria. cyfrif. Yn ogystal â'r bacteriomedrau hyn, mae yna hefyd ddull amcangyfrif ar gyfer cymhareb arwynebedd y ceg y groth i arwynebedd y maes gweledol a welir yn uniongyrchol o dan y microsgop, a ddefnyddir yn gyffredinol ar gyfer archwiliad bacteriolegol o laeth. Mae manteision dull cyfrif uniongyrchol microsgop yn reddfol, yn gyflym ac yn hawdd i'w gweithredu. Fodd bynnag, anfantais y dull hwn yw mai'r canlyniad mesuredig fel arfer yw swm y celloedd marw a byw. Ar hyn o bryd, mae rhai dulliau i oresgyn y diffyg hwn, megis y cyfuniad o facteria hyfyw staenio diwylliant microchamber (amser byr) ac ychwanegu atalyddion rhaniad celloedd i gyflawni pwrpas cyfrif bacteria hyfyw yn unig.
Yn yr arbrawf hwn, defnyddiwyd hemocytomedr fel enghraifft ar gyfer cyfrif microsgopig uniongyrchol. Ar gyfer defnyddio'r ddau fath arall o gownteri bacteria, cyfeiriwch at gyfarwyddiadau pob gwneuthurwr. Mae cyfrif yn uniongyrchol o dan y microsgop gyda hemocytomedr yn ddull a ddefnyddir yn gyffredin ar gyfer cyfrif micro-organebau. Mae'r plât cyfrif yn sleid wydr arbennig, y mae tri llwyfan yn cael eu ffurfio gan bedwar slot; mae'r llwyfan ehangach yn y canol wedi'i rannu'n ddwy hanner gan slot trawsbynciol byr, ac mae grid ar bob ochr i'r platfform. Rhennir pob grid yn naw sgwâr mawr, a'r sgwâr mawr yn y canol yw'r ystafell gyfrif. Dangosir adeiledd y plât cyfrif celloedd gwaed yn Ffigur l{{{{10}}}. Yn gyffredinol, mae gan raddfa'r ystafell gyfrif ddau fanyleb, mae un yn sgwâr mawr wedi'i rannu'n 25 sgwâr canol, ac mae pob sgwâr canol wedi'i rannu'n 16 sgwâr bach (Ffigur 15-2); sgwâr mawr yw'r llall. Rhennir y sgwâr yn 16 sgwâr canol, ac mae pob sgwâr canol wedi'i rannu'n 25 sgwâr bach, ond ni waeth pa fath o fwrdd cyfrif ydyw, mae yna 400 o sgwariau bach ym mhob sgwâr mawr. Hyd ochr pob sgwâr mawr yw 1mm, ac arwynebedd pob sgwâr mawr yw 1mm2. Ar ôl gorchuddio â gwydr gorchudd, mae'r uchder rhwng y gwydr gorchudd a'r gwydr sleidiau yn 0.1mm, felly mae cyfaint y siambr gyfrif yn 0.lmm3 (milfed rhan o fililiter). Ffigur 15-1 Strwythur y bwrdd cyfrif celloedd gwaed (1) Ffigur 15-2 Strwythur y bwrdd cyfrif celloedd gwaed (2) A. Golygfa flaen; B. Golwg adran hydredol; Y grid chwyddedig, y sgwâr mawr yn y canol yw'r siambr gyfrif 1. Celloedd gwaed Plât cyfrif; 2. Gorchuddiwch wydr; 3. Wrth gyfrif yn y siambr gyfrif, fel arfer cyfrifwch gyfanswm nifer y bacteria mewn pum sgwâr, yna cyfrifwch gyfartaledd pob sgwâr, a lluoswch â 25 neu 16 i gael cyfanswm nifer y bacteria mewn sgwâr mawr wedyn yn cael ei drawsnewid yn y cyfanswm nifer y bacteria mewn 1ml o hydoddiant bacteriol. Gadewch i gyfanswm nifer y bacteria yn y pum sgwâr fod yn A, a chymhareb gwanhau'r hydoddiant bacteriol i fod yn B. Os yw'n blât cyfrif gyda 25 sgwâr, cyfanswm nifer y bacteria mewn 1 mL o hydoddiant bacteriol {{26} } A/5×25×104×B=50000A·B(darnau) Yn yr un modd, os yw'n blât cyfrif gyda 16 sgwâr canolig, cyfanswm nifer y bacteria mewn hydoddiant bacteriol 1ml=A/ 5×16×104×B=32000A·B (darnau)
3. Offer
1. Bacteria
Saccharomyces cerevisiae
2. Offerynnau neu offer eraill
Hemocytometer, microsgop, slip gorchuddio, dropper capilari di-haint.
4. Camau gweithredu
1. Paratoi ataliad bacteriol
Paratowyd Saccharomyces cerevisiae i ataliad bacteriol o grynodiad priodol â saline ffisiolegol di-haint.
2. Ystafell gyfrif microsgop
Cyn ychwanegu samplau, archwiliwch siambr gyfrif y plât cyfrif yn ficrosgopig. Os oes baw, mae angen ei lanhau a'i sychu cyn ei gyfrif.
3. Ychwanegu sampl
Gorchuddiwch yr hemocytomedr glân a sych gyda gorchuddion, ac yna defnyddiwch dropiwr capilari di-haint i ollwng diferyn bach o'r ataliad Saccharomyces cerevisiae wedi'i ysgwyd o ymyl y gorchuddion, a gadewch i'r hydoddiant bacteriol symud yn awtomatig ar hyd y bwlch trwy osmosis capilari. Wrth fynd i mewn i'r ystafell gyfrif, gellir llenwi'r ystafell gyfrif gyffredinol â hylif bacteriol. Wrth samplu, ysgwyd yr ateb bacteriol yn gyntaf; wrth ychwanegu samplau, ni ddylid cynhyrchu unrhyw swigod aer yn y siambr gyfrif.
4. Cyfrif microsgop
Ar ôl ychwanegu'r sampl, arhoswch yn llonydd am 5 munud, yna rhowch y hemocytometer ar y cam microsgop, darganfyddwch leoliad y siambr gyfrif yn gyntaf gyda microsgop pŵer isel, ac yna newidiwch i ficrosgop pŵer uchel ar gyfer cyfrif. Addaswch ddwysedd y golau microsgop yn briodol. Ar gyfer microsgopau sy'n defnyddio drychau ar gyfer goleuo, rhowch sylw i beidio â gwyro o un ochr i'r golau, fel arall ni fydd yn hawdd gweld llinellau sgwâr yr ystafell gyfrif yn glir ym maes gweledigaeth, neu dim ond llinellau fertigol neu linellau llorweddol fydd. cael eu gweld. Os canfyddir bod yr hydoddiant bacteriol yn rhy gryno neu'n rhy wanedig cyn ei gyfrif, mae angen ail-addasu'r gwanhau cyn cyfrif. Yn gyffredinol, mae'r gwanhau sampl yn gofyn am tua 5 i 10 bacteria ym mhob cell fach. Mae pob siambr gyfrif yn dewis 5 cell ganol (dewisol 4 cornel ac un gell ganol yn y canol) ar gyfer cyfrif. Yn gyffredinol, dim ond ar y llinellau uchaf a'r dde y cyfrifir y celloedd sydd wedi'u lleoli ar y llinell grid. Yn achos egin burum, pan fydd maint y blagur yn cyrraedd hanner y fam gell, caiff ei gyfrif fel dwy gell bacteriol. I gyfrif sampl, cyfrifwch gynnwys bacteriol y sampl trwy gyfrifo'r gwerth cyfartalog o'r ddwy siambr gyfrif.
5. Golchwch y cyfrif celloedd gwaed
Ar ôl ei ddefnyddio, rinsiwch y bwrdd cyfrif celloedd gwaed â dŵr yn y tap, peidiwch â phrysgwydd â gwrthrychau caled, a'i sychu ar eich pen eich hun neu gyda sychwr gwallt ar ôl golchi. Archwiliad microsgopig i weld a oes bacteria gweddilliol neu waddodion eraill ym mhob cell fach. Os nad yw'n lân, rhaid ei olchi dro ar ôl tro nes ei fod yn lân.
