Gwahaniaeth rhwng Microsgop Fflworoleuedd a Microsgop Normal
1. Edrychwch ar y dull goleuo
Yn gyffredinol, mae'r dull goleuo o ficrosgop fflworoleuedd yn epi-fath, hynny yw, gosodir y ffynhonnell golau ar y sampl prawf trwy'r lens gwrthrychol.
2. Edrychwch ar y penderfyniad
Mae microsgopau fflworoleuedd yn defnyddio golau uwchfioled fel ffynhonnell golau, gyda thonfedd cymharol fyr, ond mae'r cydraniad yn uwch na microsgopau optegol cyffredin.
3, y gwahaniaeth yn y hidlydd
Mae microsgop fflworoleuedd yn defnyddio dwy hidlydd arbennig, a ddefnyddir o flaen y ffynhonnell golau i hidlo golau gweladwy, a'i ddefnyddio rhwng y lens gwrthrychol a'r sylladur i hidlo golau uwchfioled, a all amddiffyn llygaid dynol.
Mae microsgop fflworoleuedd hefyd yn fath o ficrosgop optegol, yn bennaf oherwydd bod y donfedd sy'n cael ei gyffroi gan y microsgop fflworoleuedd yn fyr, felly mae hyn yn arwain at y gwahaniaeth yn strwythur a defnydd y microsgop fflworoleuedd a'r microsgop cyffredin. Mae gan y rhan fwyaf o'r microsgopau fflworoleuedd swyddogaeth dda o ddal golau gwan. , felly o dan fflworoleuedd hynod o wan, mae ei allu delweddu hefyd yn dda. Ynghyd â gwelliant parhaus microsgopeg fflworoleuedd yn y blynyddoedd diwethaf, mae sŵn hefyd wedi'i leihau'n fawr. Felly, defnyddir mwy a mwy o ficrosgopau fflworoleuedd.
Gwybodaeth am Ficrosgopeg Fflworoleuedd Dau Ffoton
Egwyddor sylfaenol cyffro dau ffoton yw: yn achos dwysedd ffoton uchel, gall moleciwlau fflwroleuol amsugno dau ffoton tonfedd hir ar yr un pryd, ac ar ôl oes cyflwr cynhyrfus byr iawn, fel y'i gelwir, yn allyrru ffoton tonfedd fer. ; mae'r effaith yr un fath â defnyddio ffoton â thonfedd hanner y donfedd hir i gyffroi moleciwl fflwroleuol. Mae cyffro dau ffoton yn gofyn am ddwysedd ffoton uchel, ac er mwyn peidio â difrodi celloedd, mae microsgopeg dau ffoton yn defnyddio laserau pwls wedi'u cloi â modd ynni uchel. Mae'r laser hwn yn allyrru golau laser gydag egni brig uchel ac egni cyfartalog isel, gyda lled pwls o ddim ond 100 femtoseconds ac amlder o 80 i 100 MHz. Pan ddefnyddir lens gwrthrychol agorfa rifiadol uchel i ganolbwyntio ffotonau'r laser pwls, y dwysedd ffoton ym mhwynt ffocws y lens gwrthrychol yw'r uchaf, ac mae'r cyffro dau ffoton yn digwydd ar ganolbwynt y lens gwrthrychol yn unig, felly nid oes angen twll pin confocal ar y microsgop dau ffoton, sy'n gwella effeithlonrwydd canfod Fflworoleuedd.
Yn y ffenomen fflworoleuedd cyffredinol, oherwydd dwysedd ffoton isel y golau excitation, dim ond un ffoton y gall moleciwl fflwroleuol ei amsugno ar yr un pryd, ac yna'n allyrru ffoton fflwroleuol trwy'r trawsnewidiad ymbelydredd, a elwir yn fflworoleuedd un-ffoton. Ar gyfer y broses excitation fflworoleuedd gyda laser fel y ffynhonnell golau, gall ffenomen fflworoleuedd dau-ffoton neu hyd yn oed aml-ffoton ddigwydd. Ar yr adeg hon, mae dwyster y ffynhonnell golau excitation a ddefnyddir yn uchel, ac mae'r dwysedd ffoton yn bodloni'r gofyniad bod y moleciwl fflwroleuol yn amsugno dau ffoton ar yr un pryd. Yn y broses o ddefnyddio laser cyffredinol fel ffynhonnell golau excitation, nid yw'r dwysedd ffoton yn ddigon o hyd i gynhyrchu amsugno dau ffoton. Fel arfer, defnyddir laser pwls femtosecond, a gall ei bŵer ar unwaith gyrraedd trefn megawat. Felly, mae tonfedd y fflworoleuedd dau-ffoton yn fyrrach na thonfedd y golau excitation, sy'n cyfateb i'r effaith a gynhyrchir gan y excitation tonfedd hanner cyffro.
Mae gan ficrosgopeg fflworoleuedd dau ffoton lawer o fanteision:
1) Mae gwasgariad yn effeithio llai ar olau tonfedd hir na golau tonfedd fer a gall dreiddio i'r sbesimen yn hawdd;
2) Nid yw'r moleciwlau fflwroleuol y tu allan i'r awyren ffocal yn gyffrous, fel y gall mwy o olau excitation gyrraedd yr awyren ffocal, fel y gall y golau excitation dreiddio i sbesimenau dyfnach;
3) Mae golau tonfedd hir ger isgoch yn llai gwenwynig i gelloedd na golau tonfedd fer;
4) Wrth edrych ar sbesimenau â microsgopeg dau ffoton, dim ond yn yr awyren ffocal y mae ffotobleaching a ffotowenwyndra yn bresennol. Felly, mae microsgopeg dau ffoton yn fwy addas ar gyfer gwylio sbesimenau trwchus na microsgopeg un ffoton, ar gyfer gwylio celloedd byw, neu ar gyfer perfformio arbrofion ffotobleaching pwynt sefydlog.
Gwybodaeth am ficrosgopeg fflworoleuedd confocal
Egwyddor sylfaenol microsgopeg fflworoleuedd confocal: gan ddefnyddio ffynhonnell golau pwynt i oleuo'r sbesimen, mae man golau bach gydag amlinelliad wedi'i ddiffinio'n dda yn cael ei ffurfio ar yr awyren ffocal. yn cynnwys holltwr y trawst. Mae'r holltwr trawst yn anfon y fflworoleuedd yn uniongyrchol i'r synhwyrydd. Mae twll pin o flaen y ffynhonnell golau a'r synhwyrydd, a elwir yn y drefn honno yn y twll pin goleuo a'r twll pin canfod. Mae dimensiynau geometrig y ddau yr un peth, tua 100-200 nm; o'i gymharu â'r man golau ar yr awyren ffocal, mae'r ddau yn gyfun, hynny yw, mae'r fan golau yn mynd trwy gyfres o lensys, ac yn olaf gellir ei ganolbwyntio ar y twll pin goleuo a'r twll pin canfod ar yr un pryd. Yn y modd hwn, gellir crynhoi'r golau o'r awyren ffocal o fewn ystod y twll canfod, tra bod y golau gwasgaredig uwchben neu o dan yr awyren ffocal yn cael ei rwystro allan o'r twll canfod ac ni ellir ei ddelweddu. Mae'r sampl yn cael ei sganio fesul pwynt gyda'r laser, ac mae'r tiwb photomultiplier ar ôl canfod y twll pin hefyd yn cael delwedd gydffocal y pwynt golau cyfatebol pwynt wrth bwynt, sy'n cael ei drawsnewid yn signal digidol a'i drosglwyddo i'r cyfrifiadur, ac yn olaf ei agregu ar y sgrin yn ddelwedd gydffocal glir o'r awyren ffocal gyfan. .
Mae pob delwedd awyren ffocal mewn gwirionedd yn drawstoriad optegol o'r sbesimen, ac mae gan y trawstoriad optegol hwn drwch penodol bob amser, a elwir hefyd yn sleisen optegol. Gan fod dwyster y golau yn y canolbwynt yn llawer mwy na'r hyn sydd ar y pwynt di-ffocws, a bod golau'r awyren nad yw'n ffocws yn cael ei hidlo allan gan y twll pin, mae dyfnder maes y system gydffocal tua sero, a sganio ar hyd y Gall echel Z wireddu tomograffeg optegol, gan ffurfio'r Arsylwi adran optegol dau ddimensiwn yn y man ffocws y sampl. Gan gyfuno'r awyren XY (awyren ffocal) sganio â'r sganio echel Z (echel optegol), trwy gronni delweddau dau-ddimensiwn o haenau olynol a phrosesu gan feddalwedd cyfrifiadurol arbennig, gellir cael delwedd tri dimensiwn o'r sampl.
Hynny yw, mae'r twll pin canfod a'r twll pin ffynhonnell golau bob amser yn canolbwyntio ar yr un pwynt, fel na all y fflworoleuedd gyffrous y tu allan i'r awyren ffocysu fynd i mewn i'r twll pin canfod.
Mynegiant syml egwyddor weithredol laser confocal yw ei fod yn defnyddio laser fel y ffynhonnell golau, ac ar sail delweddu microsgop fflworoleuedd traddodiadol, mae dyfais sganio laser a dyfais ffocysu cyfun ynghlwm, a chaffael a phrosesu delwedd ddigidol. system yn cael ei reoli gan gyfrifiadur.
