Gwahaniaeth rhwng Microsgop Cyffredin a Microsgop Fflworoleuedd
Mae microsgopau fflworoleuedd yn defnyddio golau uwchfioled fel ffynhonnell golau i arbelydru'r gwrthrych i'w archwilio, fel bod y gwrthrych yn allyrru golau, ac yna'n arsylwi'r gwrthrych o dan y microsgop. Fe'i defnyddir yn bennaf ar gyfer celloedd immunofluorescence. Mae'n cynnwys ffynhonnell golau yn bennaf, system plât hidlo a system optegol i arsylwi delwedd fflwroleuol y sampl trwy chwyddo'r sylladur a lens gwrthrychol. Gadewch i ni edrych ar y gwahaniaeth rhwng y microsgop fflworoleuedd hwn a microsgop optegol cyffredin.
1. O ran dulliau goleuo
Yn gyffredinol, mae dull goleuo'r microsgop fflworoleuedd yn episgopig, hynny yw, mae'r ffynhonnell golau yn cael ei ragamcanu ar y sampl prawf trwy'r lens gwrthrychol.
2. O ran penderfyniad
Mae microsgopau fflworoleuedd yn defnyddio golau uwchfioled fel ffynhonnell golau. Mae'r donfedd yn gymharol fyr, ond mae'r cydraniad yn uwch na microsgopau optegol cyffredin.
3. Y gwahaniaeth yn yr hidlydd
Mae'r microsgop fflworoleuedd yn defnyddio dwy hidlydd arbennig, a ddefnyddir o flaen y ffynhonnell golau i hidlo golau gweladwy, a'u defnyddio rhwng y lens gwrthrychol a'r sylladur i hidlo golau uwchfioled, a all amddiffyn llygaid dynol.
Mae microsgop fflworoleuedd hefyd yn fath o ficrosgop optegol, yn bennaf oherwydd bod y donfedd cyffroi gan ficrosgop fflworoleuedd yn fyr, felly mae hyn yn arwain at y gwahaniaeth mewn strwythur a defnydd rhwng microsgop fflworoleuedd a microsgop cyffredin. Mae gan y mwyafrif o ficrosgopau fflworoleuedd swyddogaeth dda o ddal golau gwan, felly o dan fflworoleuedd hynod o wan, mae ei allu delweddu hefyd yn dda. Ynghyd â gwelliant parhaus microsgopau fflworoleuedd yn ystod y blynyddoedd diwethaf, mae'r sŵn hefyd wedi'i leihau'n fawr. Felly defnyddir mwy a mwy o ficrosgopau fflworoleuedd.
Gwybodaeth am ficrosgopeg fflworoleuedd dau ffoton
Egwyddor sylfaenol cyffro dau ffoton yw: yn achos dwysedd ffoton uchel, gall moleciwlau fflwroleuol amsugno dau ffoton tonfedd hir ar yr un pryd, ac allyrru ffoton tonfedd fyrrach ar ôl cyfnod byr o oes cyflwr cyffrous fel y'i gelwir. . ; mae'r effaith yr un fath â defnyddio ffoton y mae ei donfedd yn hanner y donfedd hir i gyffroi moleciwl fflwroleuol. Mae cyffro dau ffoton yn gofyn am ddwysedd ffoton uchel. Er mwyn peidio â difrodi celloedd, mae microsgopeg dau ffoton yn defnyddio laserau pwls ynni uchel wedi'u cloi â modd. Mae gan y laser a allyrrir gan y laser hwn ynni brig uchel ac ynni cyfartalog isel, dim ond 100 femtoseconds yw ei led pwls, a gall ei amlder gyrraedd 80 i 100 megahertz. Wrth ddefnyddio lens gwrthrychol agorfa rifiadol uchel i ganolbwyntio ffotonau'r laser pwls, y dwysedd ffoton ym mhwynt ffocws y lens gwrthrychol yw'r uchaf, ac mae'r cyffro dau ffoton yn digwydd ar ganolbwynt y lens gwrthrychol yn unig, felly nid oes angen twll pin confocal ar y microsgop dau ffoton, sy'n gwella effeithlonrwydd canfod Fflworoleuedd.
Mewn ffenomenau fflworoleuedd cyffredinol, oherwydd dwysedd ffoton isel y golau excitation, dim ond un ffoton y gall moleciwl fflwroleuol ei amsugno ar yr un pryd, ac yna'n allyrru ffoton fflwroleuol trwy drawsnewidiad radiative, sef fflworoleuedd un-ffoton. Ar gyfer y broses excitation fflworoleuedd gan ddefnyddio laser fel y ffynhonnell golau, gall fflworoleuedd dau-ffoton neu hyd yn oed aml-ffoton ddigwydd. Ar yr adeg hon, mae dwyster y ffynhonnell golau excitation a ddefnyddir yn uchel, ac mae'r dwysedd ffoton yn bodloni gofynion moleciwlau fflwroleuol sy'n amsugno dau ffoton ar yr un pryd. Yn y broses o ddefnyddio laser cyffredinol fel y ffynhonnell golau excitation, nid yw'r dwysedd ffoton yn ddigon o hyd i gynhyrchu'r ffenomen amsugno dau ffoton. Fel arfer, defnyddir laser pwls femtosecond, a gall ei bŵer ar unwaith gyrraedd trefn megawat. Felly, mae tonfedd fflworoleuedd dau-ffoton yn fyrrach na thonfedd golau excitation, sy'n cyfateb i'r effaith a gynhyrchir gan excitation ar hanner y donfedd excitation.
Mae gan ficrosgopeg fflworoleuedd dau ffoton lawer o fanteision:
1) Mae gwasgariad yn effeithio llai ar olau tonfedd hir na golau tonfedd fer ac mae'n treiddio i'r sbesimen yn hawdd;
2) Nid yw'r moleciwlau fflwroleuol y tu allan i'r awyren ffocal yn gyffrous, fel y gall mwy o olau excitation gyrraedd yr awyren ffocal, fel y gall y golau excitation dreiddio i sbesimenau dyfnach;
3) Mae golau tonfedd hir ger isgoch yn llai gwenwynig i gelloedd na golau tonfedd fer;
4) Wrth ddefnyddio microsgop dau ffoton i arsylwi sbesimenau, mae ffotobleaching a ffotowenwyndra yn digwydd yn yr awyren ffocal yn unig. Felly, mae microsgopeg dau ffoton yn fwy addas na microsgopeg un ffoton ar gyfer arsylwi sbesimenau trwchus, ar gyfer arsylwi celloedd byw, neu ar gyfer arbrofion ffotobleachu yn y fan a'r lle.
Gwybodaeth am ficrosgopeg fflworoleuedd confocal
Egwyddor sylfaenol microsgopeg fflworoleuedd confocal: defnyddir ffynhonnell golau pwynt i arbelydru'r sbesimen, a ffurfir man golau bach wedi'i ddiffinio'n dda ar yr awyren ffocal. cynnwys holltwyr. Mae'r holltwr trawst yn anfon y fflworoleuedd yn uniongyrchol i'r synhwyrydd. Mae twll pin o flaen y ffynhonnell golau a'r synhwyrydd, a elwir yn y drefn honno yn y twll pin goleuo a'r twll pin canfod. Mae maint geometrig y ddau yr un peth, tua 100-200nm; o'i gymharu â'r man golau ar yr awyren ffocal, mae'r ddau yn gyfun, hynny yw, mae'r fan golau yn mynd trwy gyfres o lensys, ac yn olaf gellir ei ganolbwyntio ar y twll pin goleuo a'r twll pin canfod ar yr un pryd. Yn y modd hwn, gellir cydgyfeirio'r golau o'r awyren ffocal o fewn cwmpas y twll canfod, tra bod y golau gwasgaredig uwchben neu o dan yr awyren ffocal wedi'i rwystro y tu allan i'r twll canfod ac ni ellir ei ddelweddu. Mae'r laser yn sganio'r sampl fesul pwynt, ac mae'r tiwb ffotomultiplier ar ôl canfod y twll pin hefyd yn cael delwedd gydffocal y pwynt golau cyfatebol fesul pwynt, sy'n cael ei drawsnewid yn signal digidol a'i drosglwyddo i'r cyfrifiadur, ac yn olaf wedi'i agregu'n glir. delwedd gydffocal o'r awyren ffocal gyfan ar y sgrin .
Mae pob delwedd awyren ffocal mewn gwirionedd yn groestoriad optegol o'r sbesimen. Mae gan y trawstoriad optegol hwn drwch penodol bob amser, a elwir hefyd yn adran denau optegol. Gan fod dwyster y golau yn y canolbwynt yn llawer mwy na'r hyn sydd ar y pwynt di-ffocws, a bod y golau awyren nad yw'n ffocws yn cael ei hidlo gan y twll pin, mae dyfnder maes y system gydffocal tua sero, a sganio ar hyd y Z -Echel yn gallu gwireddu tomograffeg optegol, gan ffurfio Arsylwi'r adran optegol dau-ddimensiwn yn y fan a'r lle ffocws y sampl. Gan gyfuno sganio awyren XY (awyren ffocal) â sganio echel Z (echel optegol), gellir cael delwedd tri dimensiwn y sampl trwy gronni delweddau dau ddimensiwn o haenau parhaus a'u prosesu gan feddalwedd cyfrifiadurol arbennig.
Hynny yw, mae'r twll pin canfod a'r twll pin ffynhonnell golau bob amser yn canolbwyntio ar yr un pwynt, fel na all y fflworoleuedd gyffrous y tu allan i'r awyren ffocal fynd i mewn i'r twll pin canfod.
Mynegiant syml egwyddor weithredol confocal laser yw ei fod yn defnyddio laser fel y ffynhonnell golau, ac ar sail delweddu microsgop fflworoleuedd traddodiadol, yn ychwanegu dyfais sganio laser a dyfais canolbwyntio cyfun, ac mae'n system ar gyfer caffael delweddau digidol a prosesu trwy reolaeth gyfrifiadurol.
