Cyfrif micro-organebau yn uniongyrchol gyda microsgop
Egwyddor arbrofol
Mae cyfrif uniongyrchol o dan ficrosgop gan ddefnyddio hemocytomedr yn ddull cyfrif microbaidd a ddefnyddir yn gyffredin. Mantais y dull hwn yw ei fod yn reddfol ac yn gyflym. Rhowch yr ataliad bacteriol sydd wedi'i wanhau'n briodol (neu'r ataliad sborau) yn y siambr gyfrif rhwng y sleid a gwydr gorchudd yr hemocytomedr, a'i gyfrif o dan y microsgop. Gan fod cyfaint y siambr gyfrif yn sefydlog (0.1mm2), gellir ei drawsnewid yn gyfanswm nifer y micro-organebau fesul uned gyfaint yn ôl nifer y micro-organebau a welwyd o dan y microsgop. Oherwydd bod y dull hwn yn cyfrif swm y bacteria byw a marw, fe'i gelwir hefyd yn ddull cyfrif cyfanswm bacteria.
Mae hemocytometer fel arfer yn sleid wydr arbennig lle mae pedwar rhigol yn ffurfio tri llwyfan. Rhennir y llwyfan yn y canol yn ddau hanner gan rhigol llorweddol byr. Mae grid wedi'i ysgythru ar y platfform ar bob ochr. Rhennir pob grid yn naw sgwâr mawr. Y sgwâr mawr yn y canol yw'r ystafell gyfrif. Mae micro-organebau yn cael eu cyfrif yn y siambr gyfrif. Dangosir strwythur y bwrdd cyfrif celloedd gwaed yn Ffigur Ⅷ-1.
Yn gyffredinol, mae gan raddfa'r ystafell gyfrif ddau fanyleb, un yw bod sgwâr mawr wedi'i rannu'n 16 sgwâr canol, ac mae pob sgwâr canol wedi'i rannu'n 25 sgwâr bach (Ffigur Ⅷ-2); sgwâr mawr yw'r llall. Rhennir y sgwâr yn 25 sgwâr canol, a rhennir pob sgwâr canol yn 16 sgwâr bach (Ffigur Ⅷ-1, C). Ond ni waeth pa fath o fwrdd cyfrif ydyw, mae nifer y sgwariau bach ym mhob sgwâr mawr yr un peth, hynny yw, 16 ×25=400 sgwariau bach, fel y dangosir yn Ffigur Ⅷ-2.
Hyd ochr pob sgwâr mawr yw 1 mm, ac arwynebedd pob sgwâr mawr yw 1 mm2. Ar ôl i'r gwydr gorchudd gael ei orchuddio, yr uchder rhwng y gwydr sleidiau a'r gwydr gorchudd yw 0.1 mm, felly cyfaint y siambr gyfrif yw 0.1mm3.
Wrth gyfrif, fel arfer cyfrifwch gyfanswm nifer y bacteria yn y pum grid canol, yna cael gwerth cyfartalog pob grid canol, ac yna lluosi â 16 neu 25 i gael cyfanswm nifer y bacteria mewn grid mawr, ac yna Troswyd i'r cyfanswm nifer y bacteria mewn hydoddiant bacteriol 1ml.
Offer labordy
Hemocytometer, microsgop, coverlip, capilari di-haint;
Deunyddiau Arbrofol
Ataliad Saccharomyces cerevisiae
Gweithdrefn arbrofol (dull cyfrif uniongyrchol microsgop microbaidd)
1. gwanhau
Gwanhau yn iawn yr ataliad Saccharomyces cerevisiae. Os nad yw'r hydoddiant bacteriol yn drwchus, nid oes angen ei wanhau.
2. Ystafell gyfrif microsgopig
Cyn ychwanegu samplau, gwnewch archwiliad microsgopig o siambr gyfrif y plât cyfrif. Os oes baw, mae angen ei lanhau cyn cyfrif.
3. ychwanegu sampl
Gorchuddiwch y plât hemocytometer glân a sych gyda gwydr gorchudd, ac yna defnyddiwch dropiwr ceg fân di-haint i ollwng diferyn bach o'r hydoddiant Saccharomyces cerevisiae gwanedig o ymyl y gwydr gorchudd (dim gormod), fel bod yr ateb bacteria yn agos at y bwlch ar hyd y bwlch. Mae osmosis capilari yn mynd i mewn i'r siambr gyfrif ar ei ben ei hun, a gellir llenwi'r siambr gyfrif gyffredinol â hylif bacteriol. Byddwch yn ofalus i beidio â chael swigod aer.
4. microsgop cyfrif
Ar ôl gorffwys am 5 munud, gosodwch yr hemocytomedr ar lwyfan y microsgop, defnyddiwch lens pŵer isel yn gyntaf i ddod o hyd i leoliad y siambr gyfrif, ac yna newidiwch i lens pŵer uchel ar gyfer cyfrif. Os canfyddir bod yr ateb bacteriol yn rhy drwchus neu'n rhy denau cyn ei gyfrif, mae angen ail-addasu'r gwanhau cyn cyfrif. Yn gyffredinol, mae'r gwanhau sampl yn gofyn am oddeutu 5-10 bacteria ym mhob cell. Mae pob siambr gyfrif yn dewis y bacteria mewn 5 grid canol (4 cornel dewisol a gridiau canolog) i'w cyfrif. Yn gyffredinol, dim ond ar y llinellau uchaf a dde y caiff y bacteria ar y llinell grid eu cyfrif. Mewn achos o egin burum, pan fydd maint y corff blagur yn cyrraedd hanner y fam gell, cyfrifwch ddau facteria. Cyfrwch sampl i gyfrifo cynnwys bacteriol y sampl o'r gwerthoedd a gyfrifwyd yn y ddwy siambr gyfrif.
5. Glanhau'r Hemocytometer
Ar ôl ei ddefnyddio, rinsiwch y plât cyfrif celloedd gwaed ar y faucet gyda jet dŵr, peidiwch â'i olchi â gwrthrychau caled, a'i sychu ar eich pen eich hun neu gyda sychwr gwallt ar ôl golchi. Archwiliad microsgopig, arsylwi a oes bacteria gweddilliol neu waddodion eraill ym mhob cell. Os nad yw'n lân, rhaid ei olchi dro ar ôl tro nes ei fod yn lân.
