Arsylwi fflworoleuedd o ficrosgop optegol
Mae fflworoleuedd yn cyfeirio at y broses lle mae sylwedd fflwroleuol yn allyrru golau â thonfedd hirach bron ar yr un pryd pan gaiff ei arbelydru â golau o donfedd benodol (Ffigur 1). Pan fydd golau tonfedd benodol (tonfedd cyffro) yn taro moleciwl, fel y rhai mewn fflworoffor, mae egni'r ffoton yn cael ei amsugno gan electronau'r moleciwl. Nesaf, mae'r electronau'n trawsnewid o gyflwr y ddaear (S0) i lefel egni uwch, sef y cyflwr cynhyrfol (S1'). Gelwir y broses hon yn excitation①. Mae'r electron yn aros yn y cyflwr cynhyrfol am 10-9–10-8 eiliad, pan fydd yr electron yn colli rhywfaint o egni②. Yn ystod y broses o electronau yn gadael y cyflwr cynhyrfus (S1) ac yn dychwelyd i'r cyflwr daear③, mae'r egni sy'n weddill sy'n cael ei amsugno yn ystod y broses gyffro yn cael ei ryddhau.
Diagram Jablonski fflwroleuol
Amser preswylio'r moleciwl fflwroleuol yn y cyflwr cynhyrfus yw'r oes fflworoleuedd, sydd ar y lefel nanosecond yn gyffredinol, ac mae'n nodwedd gynhenid o'r moleciwl fflwroleuol ei hun. Gall Fflworoleuedd Delweddu Oes (FLIM), sy'n defnyddio technoleg delweddu oes fflworoleuedd, berfformio mesuriadau swyddogaethol manylach yn ogystal â delweddu dwyster fflworoleuedd, a chael cydffurfiad moleciwlaidd, rhyngweithiadau rhyngfoleciwlaidd, a micro-amgylchedd moleciwlau, ac ati Gwybodaeth sy'n anodd ei defnyddio. gael gyda delweddu optegol confensiynol.
Un o nodweddion pwysig fflworoleuedd arall yw symudiad Stokes, sef y gwahaniaeth tonfedd rhwng y cyffro a'r brigau allyriadau (Ffigur 2). Yn nodweddiadol mae'r donfedd allyriad yn hirach na'r donfedd cyffroi. Mae hyn oherwydd bydd electronau'n colli rhan o'u hegni trwy'r broses ymlacio ar ôl i'r sylwedd fflwroleuol gyffroi a chyn rhyddhau ffotonau. Mae sylweddau fflwroleuol gyda sifftiau Stokes mwy yn haws i'w gweld o dan ficrosgop fflworoleuedd.
microsgop fflworoleuedd
Mae microsgop fflworoleuedd yn ficrosgop optegol sy'n defnyddio priodweddau fflworoleuedd ar gyfer arsylwi a delweddu, ac fe'i defnyddir yn eang mewn amrywiol feysydd megis bioleg celloedd, niwrobioleg, botaneg, microbioleg, patholeg a geneteg. Mae gan ddelweddu fflworoleuedd fanteision sensitifrwydd uchel a phenodoldeb uchel, ac mae'n addas iawn ar gyfer arsylwi dosbarthiad proteinau ac organynnau penodol mewn meinweoedd a chelloedd, astudio colocalization a rhyngweithio, olrhain prosesau deinamig bywyd megis newidiadau crynodiad ïon. , etc.
Nid yw'r rhan fwyaf o foleciwlau mewn celloedd yn fflworoleuol, ac os ydych chi am eu gweld, rydych chi'n eu labelu'n fflwroleuol. Mae yna lawer o ddulliau o labelu fflworoleuol, megis labelu uniongyrchol (fel defnyddio DAPI i labelu DNA), neu imiwneiddio gan ddefnyddio priodweddau rhwymo antigen gwrthgyrff, neu ddefnyddio proteinau fflwroleuol (fel GFP, protein fflwroleuol gwyrdd) i labelu proteinau targed , a rhwymiad cildroadwy. llifynnau synthetig (fel Fura-2), ac ati.
Microsgop Fflworoleuedd Gwrthdro MF53-N
Ar hyn o bryd, mae'r microsgop fflworoleuedd wedi dod yn offer delweddu safonol amrywiol labordai a llwyfannau delweddu, ac mae'n gynorthwyydd da ar gyfer ein harbrofion dyddiol. Rhennir microsgopau fflworoleuedd yn dri chategori yn bennaf: microsgopau fflworoleuedd unionsyth (addas i'w rhannu), microsgopau fflworoleuedd gwrthdro (sy'n addas ar gyfer celloedd byw, gan ystyried rhannu), stereosgopau fflwroleuol (addas ar gyfer sbesimenau mwy, megis planhigion, pysgod sebra (oedolyn / embryo). ), medaka, organau llygoden/llygoden fawr, ac ati).
Defnyddir technoleg delweddu microsgopeg fflworoleuedd yn eang ac mae'n gyfoethog mewn mathau, ac mae technolegau newydd yn dal i ddod i'r amlwg. Gallwch ddewis y dechnoleg i gwblhau eich ymchwil eich hun.
