Sut gallwch chi ddewis y microsgop confocal cywir i chi? A oes unrhyw ddull penodol?
Mae gan ficrosgopeg confocal fwy o fanteision na microsgopeg maes llydan. Gall microsgopeg confocal wneud toriadau optegol parhaus o samplau ac eithrio ymyrraeth signal o awyrennau di-ffocal. Am y rheswm hwn, mae cymhwyso microsgopeg confocal yn wir yn fwy cyffredin. Fodd bynnag, mae mwy a mwy o ficrosgopau confocal ar y farchnad. Sut i ddewis?
Mae gan ficrosgopeg confocal fwy o fanteision na microsgopeg maes llydan. Gall microsgopeg confocal wneud rhannau optegol parhaus o samplau ac eithrio ymyrraeth signal o awyrennau di-ffocal. Am y rheswm hwn, mae microsgopeg confocal yn wir yn fwy cyffredin. Fodd bynnag, mae mwy a mwy o ficrosgopau confocal ar y farchnad. Sut i ddewis? Wrth ddewis microsgop confocal, mae dwy ystyriaeth sylfaenol a phwysig: y math o sampl rydych chi am ei astudio (ee, celloedd sefydlog neu fyw), a'r math o assay rydych chi am ei berfformio (ee prosesau cellog statig neu ddeinamig).
Delweddu cydffocal o gelloedd sefydlog
I ddelweddu celloedd neu feinweoedd sefydlog a staen, rydym yn gyffredinol yn dewis confocal sganio laser (LSCM). Mae hyn yn bennaf oherwydd nad oes gan gelloedd marw sefydlog ddigwyddiadau biolegol cyflym mewn celloedd byw a gallant elwa'n well o gydraniad gofodol uwch LSCM. Delweddu LSCM yw sleisio'r sampl yn optegol trwy laser, ac mae'r cyflymder sganio (yn dibynnu ar gyflymder y drych arae sganio) yn gyffredinol yn 1fps. Mae amseroedd amlygiad hirach yn golygu mwy o risg o ffotobleaching, ond ar gyfer celloedd marw sefydlog nid yw amser yn hollbwysig a gallwn ei gyfartalu trwy dynnu lluniau lluosog.
Delweddu cydffocal o gelloedd byw
Mae delweddu celloedd byw yn gofyn am amddiffyniad ychwanegol rhag amgylcheddau anghyfeillgar. Wrth ddelweddu, ein hystyriaeth gyntaf yw cynnal hyfywedd celloedd ac iechyd. Mae elfennau gwresogi tymheredd cyson a systemau darlifiad yn hanfodol, yn enwedig ar gyfer astudiaethau treigl amser. Y digwyddiadau biocemegol cyflym sy'n rheoli cyflwr ffisiolegol celloedd byw yw'r hyn y mae'r rhan fwyaf o bobl am ei astudio, ond mae'r digwyddiadau hyn yn rhy gyflym ar gyfer LSCM confensiynol. Yn ogystal, roedd amlygiad hirfaith i LSCM hefyd wedi achosi difrod golau gwenwynig i gelloedd. Felly, mae delweddu celloedd byw yn gofyn am ficrosgopau confocal arbennig.
Yn gyffredinol mae dau opsiwn ar gyfer delweddu confocal o gelloedd byw: sganio cyflym sganio laser confocals a confocals disg nyddu. Mae microsgopeg confocal sganio cyflym yn disodli drychau galfanomedr arafach gyda drychau sganio soniarus cyflymach, gan alluogi cyflymder sganio hyd at 30fps; tra bod confocals disg nyddu (SDCMs) yn cael y fantais o sganio cyflymach (er yn anochel ar golled Cydraniad gofodol), gall ei gyflymder yn ddamcaniaethol gyrraedd 2000fps (yn ymarferol mae'n gyfyngedig yn aml gan ffactorau eraill).
Os ydych chi'n poeni am ffotobleaching neu signal fflworoleuedd gwan iawn, yna efallai y bydd SDCM yn fwy addas. Mae SDCM yn defnyddio dwy ddisg gylchdroi gyda microwells arae i wasgaru'r golau cyffroi. Yn wahanol i LSCM, sy'n sganio'r smotyn sampl, mae SDCM yn caffael smotiau lluosog ar y tro (tua 100 o smotiau picsel), felly mae'r cyflymder yn cynyddu'n fawr, ac mae ffotobleaching SDCM a llai o wenwynedd. Fodd bynnag, gallwch hefyd ddefnyddio confocals sganio cyflym i gynyddu cyflymder sganio, ynghyd â synwyryddion sensitif iawn, a lleihau egni golau excitation i leihau ffotowenwyndra, a all gynnal swyddogaethau cyfoethog confocals traddodiadol.
System ddelweddu confocal awtomataidd
Mae rhai ymchwilwyr yn hoffi dod o hyd i ffyrdd o addasu'r microsgop i weddu i'w hanghenion unigol. Ac nid oes gan rai ymchwilwyr ddiddordeb hyd yn oed mewn sut mae microsgopau'n gweithio mewn gwirionedd. Ar gyfer yr olaf, gall microsgop confocal awtomataidd fod yn fwy at eu dant. Er enghraifft, mae'r Olympus FluoViewFV10i yn ficrosgop cydffocal laser bwrdd gwaith mor gwbl awtomatig 4-. Nid oes angen bron unrhyw le gosod ar ei strwythur integredig cryno. Mae'r math hwn o offeryn yn ddelfrydol ar gyfer ymchwilwyr sydd angen gwneud llawer o gaffael data delwedd bob dydd, ond wrth gwrs nid ydynt yn adlewyrchu ymarferoldeb a hyblygrwydd confocals traddodiadol yn llawn. Yn ogystal, mae'r NikonA1 hefyd yn system gydffocal gwbl awtomatig. Fel y mwyafrif o ficrosgopau sganio confocal confensiynol, mae'r NikonA1 yn defnyddio pen sgan galfanomedr, sydd â chydraniad uwch na'r A1R gyda phen sgan hybrid, ond cyflymder ychydig yn arafach (A1R ~ 30fps)
