Nodweddion a Chymwysiadau Microsgop Cydffocal Laser
Tra mewn microsgop arferol mae plân delwedd yr arsylwi wedi'i ynysu oddi wrth y planau echelinol cyfagos trwy orgyffwrdd plân ffocal y lens gwrthrychol â'r synhwyrydd, mewn microsgop confocal cyflawnir yr ynysu hwn trwy oleuo'r sampl gyda phwynt diffreithiant cyfyngedig o golau a hidlo golau crwydr trwy ddefnyddio twll pin yn llwybr y golau a gasglwyd yn ffocws cyfun y pwynt golau hwn i gyflawni'r ynysu hwn a thrwy hynny wella datrysiad.
Dim ond y golau a adlewyrchir yn ôl o'r haen sampl gyfun sy'n gallu mynd trwy'r twll pin yn y llwybr golau casglu, tra bod gweddill yr adlewyrchiadau haen sampl amherthnasol yn cael eu rhwystro gan y twll pin. Mae hyn yn rhoi cynnydd sylweddol mewn datrysiad. Isod, dangosir cymhariaeth ochr-yn-ochr o ficrosgopeg fflworoleuedd amlddimensiwn a microsgopeg confocal o'r un sampl drwchus. Pan dynnir cyfres o ddelweddau ar wahanol awyrennau ffocal, cynhyrchir delwedd y cyfeirir ati'n gyffredin fel "z-stack", sy'n dangos yr enillion cydraniad a chyferbyniad a ddarperir gan ficrosgopeg confocal a'r rhesymau sylfaenol dros yr enillion hyn. Gellir gweld bod archwilio'r ddelwedd ar ben y pentwr lle mae'r awyren ddelweddu uwchben y meinwe yn datgelu llawer iawn o olau gwasgaredig yn y ddelwedd fflworoleuedd, tra bod delwedd y microsgop confocal yn ymddangos yn ddu. Mae'r gostyngiad hwn mewn PSF yn y cyfeiriad echelinol yn cyfrannu'n uniongyrchol at y gwahaniaeth mewn datrysiad a welwyd yn y rhyngwyneb optegol yng nghanol y stac z.
Delweddu sganio tafell optegol
Nodwedd arall o ficrosgopeg confocal sganio laser yw ei fod yn dechneg sganio delweddu. Mae technegau goleuo maes eang traddodiadol yn goleuo'r sampl gyfan fel y gellir dal y ddelwedd yn uniongyrchol gan y llygad noeth neu synhwyrydd, ond mae LSCM yn defnyddio un neu fwy o belydrau golau â ffocws i sganio trwy'r sampl, fel bod y ddelwedd sy'n deillio o hyn yn cael ei galw'n sleisen optegol, fel y dangosir yn y diagram canlynol. Dangosir y gwahaniaeth rhwng goleuo maes eang traddodiadol a goleuo confocal sganio laser isod.
Felly, dangosir ffordd ymarferol o ficrosgopeg confocal modern yn y ffigur isod. Mae'r golau excitation o'r laser yn cael ei basio trwy ddrych deucroig a'i sganio trwy bâr o ddrychau galfanomedr yng nghyfeiriad-x a chyfeiriad-y y sampl, ac mae cyffro (neu adlewyrchiad) y sampl yn mynd trwy dwll pin i'r PMT canfodydd i'w recordio, ac mae'r ddelwedd wedi'i sganio wedi'i recordio yn cael ei hail-greu gan gyfrifiadur i gynhyrchu delwedd wirioneddol o'r sampl.
