Ystafell Ddosbarth Delweddu Microsgopig丨Microsgop Fflworoleuedd Widefield
Mewn cymwysiadau delweddu celloedd byw, mae microsgopeg fflworoleuedd maes llydan yn hwyluso arsylwi deinameg celloedd ymlynol a dyfir mewn siambrau amgylcheddol penodol a osodir ar y cam microsgop. Yn ei ffurfweddiad mwyaf sylfaenol, mae microsgop diwylliant meinwe gwrthdro safonol wedi'i gyfarparu â goleuo fflworoleuedd EPI yn cael ei gyfuno â system canfod arae ardal (camera CCD fel arfer), hidlwyr fflworoleuedd addas, a system caead i gyfyngu ar amlygiad gormodol celloedd i olau cyffro niweidiol. . Mae microsgopeg fflworoleuedd sylfaenol yn dibynnu ar hidlwyr ymyrraeth sydd wedi'u paru'n ofalus i ddewis lled bandiau penodol ar gyfer goleuo a chanfod golau a allyrrir. Mae ffynonellau golau yn cynnwys mercwri, xenon, a lampau arc halid metel, systemau laser ehangu trawst, a deuodau allyrru golau (LEDs), ac mae angen manylebau hidlo gwahanol ar bob un ohonynt. Mae gan fflworofforau synthetig a ddefnyddir mewn microsgopeg fflworoleuedd sbectra allyriadau sy'n cwmpasu'r rhanbarthau bron-uwchfioled, gweladwy a bron isgoch. Mae'r defnydd o broteinau fflwroleuol wedi'u hamgodio'n enetig wedi ehangu galluoedd microsgopeg fflworoleuedd mewn delweddu celloedd byw yn fawr, gan ganiatáu i ymchwilwyr dargedu rhanbarthau diddordeb isgellog yn fanwl gywir.
Mae Nuohai LS 18, math newydd o ficrosgop goleuo golau a ddatblygwyd yn annibynnol gan Nuohai, wedi'i ddylunio'n arbennig ar gyfer delweddu 3D cydraniad uchel o samplau meinwe mawr tryloyw, ac mae'n ymroddedig i archwilio meinweoedd cyfan amrywiol megis yr ymennydd, dueg, coluddyn bach. , aren, ysgyfaint, calon, a thiwmor. Strwythur union 3D yr organau.
Mewn fflworoleuedd maes eang, mae'r allyriadau agorfa lawn a gesglir gan yr amcan microsgop yn gwneud y mwyaf o'r signal a gofnodwyd tra'n lleihau'r amser datguddiad gofynnol. Felly, gellir delweddu samplau gyda chyfnodau golau byr iawn. Prif anfantais delweddu maes llydan yw bod fflworoleuedd o ranbarthau ymhell o'r awyren ffocal, yn ogystal â signal cefndir, yn olau diangen sy'n aml yn cuddio nodweddion o ddiddordeb. Felly, delweddu maes llydan sy'n rhoi'r canlyniadau gorau pan fo'r nodweddion o ddiddordeb yn fawr (fel organynnau) neu'n atalnod iawn eu natur. Mae amrywiaeth eang o samplau celloedd byw, gan gynnwys celloedd ymlynol, bacteria, burum, ac adrannau meinwe tenau iawn, yn ymgeiswyr delfrydol ar gyfer delweddu fflworoleuedd maes eang, fodd bynnag, mae'n well defnyddio meinweoedd mwy trwchus (dros 5 micron) gyda delweddu dull mwy datblygedig.
Er y bu llawer o ddatblygiadau mewn delweddu fflwroleuol gyda lliwiau fflwroleuol synthetig, dotiau cwantwm, a phroteinau fflwroleuol, mewn rhai achosion mae'n ddefnyddiol cyfuno fflworoleuedd â dulliau delweddu eraill. Er enghraifft, gellir defnyddio DIC ar y cyd â fflworoleuedd maes eang i fonitro hyfywedd celloedd a morffoleg gyffredinol wrth astudio ffenomenau o ddiddordeb ar gyfer targedau penodol wedi'u labelu. Mae caffael DIC a fflworoleuedd mewn un ddelwedd fel arfer yn anymarferol, ond mewn microsgop wedi'i ffurfweddu'n gywir gellir defnyddio'r ddwy dechneg yn olynol. Felly, ar ôl delweddu yn y modd epifluorescence, gellir caffael delweddau DIC o samplau wedi'u labelu'n fflwroleuol gan ddefnyddio golau a drosglwyddir. Gellir cyfuno'r ddwy ddelwedd yn ystod ôl-ddadansoddiad. Mae'n bosibl caffael delweddau DIC a fflworoleuedd ar yr un pryd mewn ffurfweddau microsgop maes eang datblygedig gan ddefnyddio goleuo wedi'i wahanu'n sbectrol (fel is-goch gweladwy a bron) ac addaswyr camera deuol neu gamera golygfa hollt. Yn y rhan fwyaf o ficrosgopau confocal sganio â laser, gellir cael delweddau mewn moddau fflworoleuedd a DIC ar yr un pryd, gan ddileu'r angen am brosesu ôl-gaffael. Gellir defnyddio cyferbyniad cam a chyferbyniad modiwleiddio Hoffman hefyd ar y cyd â microsgopeg fflworoleuedd maes llydan. Fodd bynnag, yn y technegau hyn, mae'r lens gwrthrychol yn arbennig, boed yn gylch cyfnod neu'n blât modiwleiddio Hoffman, bydd yn achosi colled dwysedd allyriadau o 5-15 y cant.
Dolen erthygl: Rhwydwaith Offer Offeryn https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
