Gofynion Paratoi Sbesimen ar gyfer Microsgopeg Fflworoleuedd
Gofynion ar gyfer Paratoi Sbesimen ar gyfer Microsgopeg Fflworoleuedd
(1) Sleid gwydr
Dylai trwch y gwydr sleidiau fod rhwng 0.8-L2mm. Bydd sleid sy'n rhy drwchus yn amsugno mwy o olau ar y naill law ac ni all ganolbwyntio'r golau excitation ar y sbesimen ar y llaw arall. Rhaid i sleidiau fod yn llyfn, yn unffurf o ran trwch, ac yn rhydd o awtofflworoleuedd amlwg. Weithiau defnyddir sleidiau cwarts.
(2) Gorchuddiwch wydr
Mae trwch y gwydr gorchudd tua 0.17mm, yn llyfn. Er mwyn cryfhau'r golau excitation, gellir defnyddio gwydr gorchudd ymyrraeth hefyd, sef gwydr gorchudd arbennig wedi'i orchuddio â sawl haen o sylweddau (fel fflworid magnesiwm) sydd ag effeithiau ymyrraeth gwahanol ar olau gwahanol donfeddi, a all wneud y fflworoleuedd llyfn. Mae golau cyffro yn cael ei basio drwodd, ac mae'r golau excitation yn cael ei adlewyrchu, a gall y golau cyffro a adlewyrchir hwn gyffroi'r sbesimen.
(3) Sbesimen
Ni ddylai sleisys meinwe neu sbesimenau eraill fod yn rhy drwchus. Os yw'r trwch yn rhy drwchus, bydd y rhan fwyaf o'r golau excitation yn cael ei fwyta yn rhan isaf y sbesimen, tra na all y rhan uchaf a welir yn uniongyrchol gan y lens gwrthrychol gael ei gyffroi'n llawn. Yn ogystal, fflworoleuedd a achosir gan orgyffwrdd celloedd neu amhureddau, cefndir staenio amhenodol yn effeithio ar y dyfarniad.
(4) drych olew
Yn gyffredinol, wrth arsylwi sbesimenau gyda microsgopau fflworoleuedd maes tywyll a microsgopau trochi olew, rhaid defnyddio olew trochi. Mae'n well defnyddio olew trochi arbennig nad yw'n fflwroleuol. Gellir defnyddio glycerin hefyd yn lle hynny, a gellir defnyddio paraffin hylif hefyd, ond mae'r mynegai plygiannol yn isel, sy'n cael effaith fach ar ansawdd delwedd.
Deall Ciwb Ysgafn Microsgopeg Fflworoleuedd
Fflworoleuedd yw'r golau y mae electronau mewn sylwedd yn amsugno egni golau o gyflwr ynni isel i gyflwr egni uchel, ac yna'n rhyddhau golau pan fydd yn dychwelyd i gyflwr ynni isel. Mae'n olau pelydredig nad yw'n dymheredd - goleuedd. Hynny yw: mae'r sylwedd yn amsugno golau tonfedd fer, yn mynd i mewn i gyflwr cynhyrfus, ac yn allyrru golau tonnau hir.
P'un a yw'n awtofflworoleuedd y sylwedd, y llifyn fflwroleuol neu'r protein fflwroleuol a fynegir gan ymasiad, mae angen iddo gael ei gyffroi gan donfedd golau penodol (Excitation). Ar ôl i'r electronau fudo a cholli egni, maen nhw'n allyrru golau o donfedd hir benodol (Emision). , y gellir ei gasglu gan y system ganfod i gyflawni'r swyddogaeth o nodi fflworoleuedd penodol.
Beth yw ciwb golau fflwroleuol?
Mewn arsylwi a delweddu microsgop fflworoleuedd, mae'r ciwb golau fflworoleuedd yn darparu golau excitation tonfedd benodol a'r golau allyriadau tonfedd hir cyfatebol, fel y gellir casglu'r signal fflworoleuedd gan y llygad noeth, sgrin arddangos neu gamera. Felly, mae'r ciwb golau fflworoleuedd yn pennu'r hyn y gellir ei ganfod Mae dyfais allweddol y signal fflworoleuedd, ei nodweddion yn cynnwys EX: paramedrau hidlo tonfedd excitation, EM: paramedrau hidlo tonfedd allyriadau a DM: paramedrau drych deuol. Cymerwch giwb golau DAPI o ficrosgop fflworoleuedd integredig Revolve fel enghraifft, EX: 385/30, EM: 450/50, DM: 425.
The light emitted by the light source passes through DAPI EX to obtain excitation light in a specific wavelength range, that is, light of 385±15nm, which specifically excites fluorescent substances that can only be excited within this range; the DM dichroic mirror separates the excitation light from the fluorescence Optical elements, as special mirrors, reflect only specific wavelengths of light and allow all other wavelengths to pass through, so only >gellir trosglwyddo golau 425nm i'r EM; Defnyddir hidlwyr allyriadau EM i wahanu'r fflworoleuedd a allyrrir gan y fflworoffor oddi wrth elfennau optegol cefndir eraill ar gyfer gwahanu golau. Mae hidlwyr allyriadau yn trosglwyddo golau ar y donfedd fflworoleuedd trwy'r drych deucroig wrth rwystro pob golau arall sy'n gollwng o'r ffynhonnell golau cyffro (a adlewyrchir o'r sampl neu'r opteg). Mae'r donfedd golau a allyrrir yn fwy nag EM i'w arsylwi, hynny yw, dim ond golau o fewn yr ystod o 450 ± 25nm sy'n mynd i mewn i'r system ganfod. Gall dewis cywir o hidlwyr EX, EM, a deuoliaeth DM helpu ymchwilwyr i gyflawni cymarebau signal-i-sŵn uwch (S/N).
