Technegau staenio ac arsylwi microsgopig o ficro-organebau
Staeniad Syml o Bacteria
1 Amcanion
1.1 Dysgu technegau sylfaenol ceg y groth a staenio microbaidd.
1.2 Meistroli'r dull staenio syml o facteria.
1.3 Dod i adnabod nodweddion morffolegol bacteria, ac i atgyfnerthu'r dysgu am ddefnyddio drych olew a thechnegau gweithredu aseptig.
2 Egwyddor Mae ceg y groth a staenio bacteria yn dechneg sylfaenol mewn arbrofion microbioleg. Mae celloedd bacteria yn fach ac yn dryloyw, nid ydynt yn hawdd eu hadnabod o dan y microsgop golau cyffredin, a rhaid eu staenio. Y defnydd o liw sengl i staenio'r bacteria, fel bod yr organeb staen a'r cefndir i ffurfio gwahaniaeth lliw clir, fel y gellir arsylwi'n gliriach ar eu morffoleg a'u strwythur. Mae'r dull hwn yn hawdd i'w berfformio ac mae'n addas ar gyfer arsylwi siâp cyffredinol yr organeb a threfniant y bacteria. Defnyddir llifynnau alcalïaidd yn gyffredin ar gyfer staenio syml, oherwydd mewn toddiannau niwtral, alcalïaidd neu wan asidig, mae celloedd bacteriol fel arfer yn cael eu cyhuddo'n negyddol, a phan fydd llifynnau alcalïaidd yn cael eu ïoneiddio, mae cyfran staenio eu moleciwlau yn cael ei gyhuddo'n bositif, felly mae cyfran staenio llifynnau alcalïaidd yn gallu rhwymo'r bacteria yn hawdd i wneud y bacteria yn lliw. Mae'r celloedd bacteriol lliw yn cyferbynnu'n sylweddol â'r cefndir ac maent yn haws eu hadnabod o dan y microsgop. Mae lliwiau a ddefnyddir yn gyffredin ar gyfer staenio syml yn cynnwys glas merocyanine, fioled grisial, a choch cyfansawdd sylfaenol. Pan fydd y dadelfeniad bacteriol o siwgr i gynhyrchu asid fel bod pH y cyfrwng yn gostwng, mae tâl cadarnhaol y bacteria yn cynyddu, ac yna gellir ei ddefnyddio mewn coch, coch asidig neu goch Congo a lliwiau asidig eraill staenio. Rhaid gosod y bacteria cyn staenio. Mae ei bwrpas yn ddeublyg: un yw lladd y bacteria a gwneud i'r bacteria gadw at y sleid; yr ail yw cynyddu ei gysylltiad â'r llifyn. Defnyddir dau ddull yn gyffredin: gwresogi a gosod cemegol. Ceisiwch gynnal morffoleg wreiddiol y celloedd wrth eu gosod.
3 Defnyddiau
3.1 Straen Bacillus subtilis 12-18h diwylliant gogwydd agar maeth, Staphylococcus aureus tua 24h maeth agar diwylliant gogwydd, Escherichia coli 24h diwylliant gogwydd agar maeth, diwylliant gogwydd agar burum pobydd.
3.2 Staen glas methylene alcalïaidd Stain Lue (neu staen fioled grisial amoniwm oxalate), staen coch cyfansawdd asid carbolig.
3.3 Offerynnau neu offer eraill Microsgop, lamp alcohol, sleid, cylch brechu, deiliad sleidiau, potel haen ddwbl (wedi'i llenwi ag olew cedrwydd a sylene), papur microsgop, saline ffisiolegol neu ddŵr distyll, ac ati.
4 Gweithdrefn Ceg y groth → sychu → sefydlogi → staenio → golchi → sychu → archwiliad microsgopig.
5 Cam
5.1 ceg y groth Cymerwch ddwy sleid lân a di-olew, pob un â gostyngiad bach o halwynog (neu ddŵr distyll) yng nghanol y sleid o dan amodau aseptig, gyda chylch brechu i weithredu'n aseptig, yn y drefn honno, o'r Bacillus subtilis, Garcinia micrococcus ac Escherichia coli yn gogwyddo i bigo ychydig o fwsogl yn y diferyn o ddŵr, gan gymysgu a gorchuddio â haenen. Os gellir defnyddio'r ceg y groth ataliad bacteriol (neu ddiwylliant hylif), i frechu'r cylch dewis 2 i 3 modrwy yn uniongyrchol ar y sleid. Sylwch na ddylai'r halwynog (dŵr distyll) a chymryd y bacteria fod yn ormod a lledaenu'n gyfartal, nid yn rhy drwchus.
5.2 Sychu Sychwch yn naturiol ar dymheredd ystafell. Gellir ei sychu hefyd trwy wresogi ychydig uwchben lamp alcohol gyda'r ochr wedi'i gorchuddio i fyny. Fodd bynnag, peidiwch â mynd yn rhy agos at y fflam, oherwydd bydd y tymheredd yn rhy uchel yn dinistrio morffoleg y bacteria.
5.3 Gosodiad Os defnyddir sychu gwres, cyfunir gosod a sychu yn un cam yn yr un modd â sychu. Taenwch, sychwch a thrwsiad gwres.
5.4 Lliwio Rhowch y sleid yn fflat ar y silff sleidiau, ychwanegwch 1 i 2 ddiferyn o doddiant staenio ar y ceg y groth (mae'r hydoddiant staenio yn gorchuddio'r ffilm ceg y groth yn briodol). Lliwiwch y ceg y groth gyda Mellanox Blue Sylfaenol Lü am 1 ~ 2 funud, a chyda Carbonad Coch (neu Fioled Grisial Amoniwm Oxalate) am tua 1 munud.
5.5 Rinsio Arllwyswch yr hydoddiant staenio a rinsiwch yn ysgafn â dŵr tap o un pen y sleid nes bod y dŵr sy'n rhedeg i lawr o'r ceg y groth yn ddi-liw. Wrth rinsio, peidiwch â gadael i'r dŵr lifo'n uniongyrchol i olchi'r wyneb gorchuddio. Ni ddylai llif y dŵr fod yn rhy gyflym nac yn rhy fawr i osgoi rhyddhau'r ffilm ceg y groth.
5.6 Sychu Ysgwydwch y diferion dŵr ar y sleid i sychu'n naturiol, gellir defnyddio papur chwythu sych neu amsugnol i amsugno sych (byddwch yn ofalus i beidio â sychu'r corff bacteriol). 5.7 Archwiliad microsgopig Mae'r ceg y groth yn cael ei sychu a'i archwilio trwy ficrosgopeg. Rhaid i'r ceg y groth fod yn hollol sych cyn y gellir ei arsylwi â microsgop olew.
6 Canlyniadau Lluniwch forffoleg E. coli a Micrococcus garciniae ar ôl staenio sengl.
Staen Gram
1 Pwrpas
1.1 Deall egwyddor staen Gram a'i bwysigrwydd wrth ddosbarthu ac adnabod bacteria.
1.2 Dysgu a meistroli'r dechneg staenio Gram ac atgyfnerthu'r dysgu am ddefnyddio lens olew y microsgop golau.
