Mae yna lawer o fanteision i ficrosgopeg fflworoleuedd dau ffoton
1) Mae gwasgariad yn effeithio llai ar olau tonfedd hir na golau tonfedd fer a gall dreiddio i'r sbesimen yn hawdd;
2) Nid yw moleciwlau fflwroleuol y tu allan i'r awyren ffocal yn gyffrous, gan ganiatáu mwy o olau excitation i gyrraedd yr awyren ffocal, gan ganiatáu i'r golau excitation dreiddio i sbesimenau dyfnach;
3) Mae golau tonfedd hir ger isgoch yn llai gwenwynig i gelloedd na golau tonfedd fer;
4) Wrth arsylwi sbesimenau gan ddefnyddio microsgop dau ffoton, dim ond ar yr awyren ffocal y mae ffotobleaching a ffotowenwynig yn digwydd. Felly, mae microsgopau dau ffoton yn fwy addas na microsgopau un ffoton ar gyfer arsylwi sbesimenau trwchus, ar gyfer arsylwi celloedd byw, neu ar gyfer perfformio arbrofion ffotobleaching pwynt sefydlog.
Gwybodaeth am ficrosgopeg fflworoleuedd confocal
Egwyddor sylfaenol microsgopeg fflworoleuedd confocal: Defnyddiwch ffynhonnell golau pwynt i oleuo'r sbesimen i ffurfio man golau bach, wedi'i ddiffinio'n dda ar yr awyren ffocal. Mae'r fflworoleuedd a allyrrir gan y fan a'r lle ar ôl cael ei oleuo yn cael ei gasglu gan y lens gwrthrychol a'i ddychwelyd i'r drych deucroig ar hyd y llwybr golau goleuo gwreiddiol. gyfystyr â hollti trawst. Mae'r sbectromedr yn anfon y fflworoleuedd yn uniongyrchol i'r synhwyrydd. Mae twll pin o flaen y ffynhonnell golau a'r synhwyrydd, a elwir yn dwll pin goleuo a'r twll pin canfod yn y drefn honno. Mae dimensiynau geometrig y ddau yn gyson, tua 100-200nm; o'i gymharu â'r pwynt golau ar yr awyren ffocal, mae'r ddau yn gyfun, hynny yw, mae'r pwynt golau yn mynd trwy gyfres o lensys ac yn y pen draw gellir ei ganolbwyntio ar y twll pin goleuo a'r twll pin canfod ar yr un pryd. Yn y modd hwn, gellir crynhoi'r golau o'r awyren ffocal o fewn y twll canfod, tra bod y golau gwasgaredig uwchben neu o dan yr awyren ffocal wedi'i rwystro y tu allan i'r twll canfod ac ni ellir ei ddelweddu. Mae'r sampl yn cael ei sganio fesul pwynt gyda'r laser, ac mae'r tiwb ffotomultiplier y tu ôl i'r twll pin canfod hefyd yn cael delwedd gydffocal y pwynt golau cyfatebol fesul pwynt, sy'n cael ei drawsnewid yn signal digidol a'i drosglwyddo i'r cyfrifiadur, ac yn cael ei agregu o'r diwedd. ar y sgrin i mewn i ddelwedd gydffocal clir o'r awyren ffocal gyfan. .
Mae pob delwedd awyren ffocal mewn gwirionedd yn groestoriad optegol o'r sbesimen. Mae gan y trawstoriad optegol hwn drwch penodol bob amser ac fe'i gelwir hefyd yn adran denau optegol. Gan fod dwyster y golau yn y ffocws yn llawer mwy na'r dwyster golau yn y di-ffocws, a bod y golau awyren di-ffocws yn cael ei hidlo gan y twll pin, mae dyfnder maes y system gydffocal tua sero. Gall sganio ar hyd cyfeiriad echel Z wireddu tomograffeg optegol, gan ffurfio'r a ddymunir Arsylwch yr adran optegol dau ddimensiwn yn y man ffocws y sampl. Trwy gyfuno sganio awyren XY (awyren ffocal) â sganio echel Z (echel optegol), trwy gronni lefelau parhaus o ddelweddau dau ddimensiwn a'u prosesu â meddalwedd cyfrifiadurol arbenigol, gellir cael delwedd tri dimensiwn o'r sampl.
Hynny yw, mae'r twll pin canfod a'r twll pin ffynhonnell golau bob amser yn canolbwyntio ar yr un pwynt, fel na all y fflworoleuedd gyffrous y tu allan i'r awyren ffocws fynd i mewn i'r twll pin canfod.
Mynegiad syml o egwyddor weithredol confocal laser yw ei fod yn defnyddio laser fel ffynhonnell golau. Ar sail delweddu microsgop fflworoleuedd traddodiadol, ychwanegir dyfais sganio laser a dyfais canolbwyntio cyfun, a rheolir y system gan gyfrifiadur i gasglu a phrosesu delweddau digidol.
