Cymhwyso Fflworoleuedd Cyfanswm Myfyrdod Mewnol Microsgopeg Fflworoleuedd
TIRFM (Microsgop Fflworoleuedd Myfyrio Cyfanswm Mewnol), microsgop fflworoleuedd adlewyrchiad mewnol cyfanswm, pan fydd golau yn mynd i mewn i gyfrwng â mynegai plygiant is o gyfrwng â mynegai plygiant uchel, os yw ongl y digwyddiad yn ddigon mawr, adlewyrchir yr holl olau heb blygiant, ond yn Mae rhyngwyneb y ddau gyfrwng yn cynhyrchu tonnau evanescent a all gyffroi'r fflworoleuedd o fewn 100nm ger y rhyngwyneb i wireddu arsylwi ar yr wyneb gwrthrych. Gellir anfon y golau excitation trwy oleuwr microsgop fflworoleuedd confensiynol neu oleuwr arbennig, a gellir rheoli ongl digwyddiad y laser. Defnyddir y dull excitation maes ar unwaith i atal y golau excitation rhag mynd i mewn i'r synhwyrydd. Mae'r golau excitation yn y rhyngwyneb rhwng gwydr a dŵr yn cynhyrchu mewnol llawn a weithredir trwy adlewyrchiad. Oherwydd gwanhad esbonyddol y golau excitation, dim ond yr ardal sampl sy'n agos iawn at gyfanswm yr arwyneb adlewyrchiad fydd yn cynhyrchu adlewyrchiad fflworoleuedd, sy'n lleihau ymyrraeth sŵn golau cefndir i'r targed arsylwi yn fawr, felly defnyddir y dechnoleg hon yn eang yn yr arsylwi deinamig o sylweddau arwyneb celloedd.
Diagram sgematig o gyfanswm microsgopeg fflworoleuedd adlewyrchiad mewnol (TIRFM)
①Sample ② Amrediad tonnau Evanescent ③ Gwydr clawr ④Ole trochi ⑤Targed ⑥ Trawst allyriadau (signal) ⑦ Beam cyffro
Er mwyn cyflawni adlewyrchiad mewnol cyflawn, mae angen ongl digwyddiad mawr, er enghraifft, mae'r ongl ddigwyddiad ar y rhyngwyneb dŵr gwydr yn fwy na 61 gradd. Gellir cyflawni hyn trwy brism, a elwir yn TIRFM seiliedig ar brism, neu gan lens gwrthrychol ag agorfa rifiadol uchel, a elwir yn wrthrychol TIRFM. Mae'r microsgopau fflworoleuedd adlewyrchiad mewnol cyfan sydd wedi'u masnacheiddio yn gyffredinol o'r math lens gwrthrychol, gyda chyflymder uchel a manwl gywirdeb uchel.
Defnyddir cyfanswm microsgopeg fflworoleuedd adlewyrchiad mewnol yn eang mewn rhai meysydd biolegol oherwydd gall sylweddoli arsylwi fflworoleuedd mewn ystod denau iawn (llai na 100nm) ar wyneb gwrthrychau. Fel y ceisiadau canlynol:
Arsylwi delweddau arwyneb celloedd: adeiledd arwyneb cellbilen, cyswllt arwyneb celloedd, deinameg arwyneb pilen / lleoleiddio protein.
Arsylwi a thrin un moleciwl: myosin, actin, a Cy3-labelu ATP.
Symudiad wyneb cellbilen: megis amlyncu fesigl, allanadlu fesigl, ac ecsocrin fesigl. yr
Arsylwi ffenomen sbarduno calsiwm yn y gellbilen, monitro sianel ïon.
Ymchwil modur moleciwlaidd: moduron cylchdro, proteinau cytosgerbydol, polymerau, proteinau G, proteinau cylch, moduron niwcleotid.
Yn ogystal â maes bioleg, mae ganddo hefyd gymwysiadau da ym maes cemeg ar gyfer arsylwi strwythurau moleciwlaidd cemegol.
