Cymhariaeth a Nodweddion Microsgopau Fflworoleuedd a Microsgopau Optegol Confensiynol
Mae microsgop fflworoleuedd yn wahanol i ficrosgop optegol arferol. Yn lle arsylwi sbesimenau dan olau o ffynhonnell golau confensiynol, mae'n defnyddio golau o donfedd penodol (fel arfer golau uwchfioled neu las-fioled) i gyffroi sylweddau fflwroleuol o fewn y sbesimen, gan achosi iddynt allyrru fflworoleuedd. Felly, nid yw ffynhonnell golau microsgop fflworoleuedd yn gwasanaethu ar gyfer goleuo uniongyrchol; mae'n gweithredu fel ffynhonnell ynni i gyffroi sylweddau fflwroleuol mewndarddol yn y sbesimen. Rydym yn gallu arsylwi'r sbesimen nid oherwydd goleuadau o'r ffynhonnell, ond oherwydd y fflworoleuedd a allyrrir gan y sylweddau fflwroleuol yn y sbesimen ar ôl amsugno'r golau cyffroi.
Mae'n dilyn mai nodwedd allweddol microsgop fflworoleuedd yw ei ffynhonnell golau, a all gyflenwi digonedd o olau excitation o fewn ystod tonfedd benodol i ddarparu dwyster cyffro digonol ar gyfer y sylweddau fflwroleuol yn y sbesimen prawf. Yn y cyfamser, rhaid i ficrosgop fflworoleuedd fod â system hidlo gyfatebol. Fel offeryn hanfodol ar gyfer histocemeg fflworoleuedd, mae'n bennaf yn cynnwys ffynhonnell golau pwysedd uchel iawn, set hidlo (gan gynnwys hidlwyr cyffroi a hidlwyr rhwystr), system optegol a system ffotograffig. Mae'n gweithio gan sbesimenau cyffrous gyda golau o donfedd penodol i gynhyrchu fflworoleuedd.
Dulliau cyffroi fflworoleuedd: Wedi'i ddosbarthu yn ôl ystod tonfedd i gyffro UV (dull goleuo uwchfioled) a chyffro BV (dull golau glas-fioled). Mae excitation UV yn defnyddio golau uwchfioled bron yn fyrrach na 400 nm ar gyfer cyffro. Nid oes unrhyw olau cyffro gweledol dan sylw, felly mae'r fflworoleuedd a arsylwyd yn dangos fflworoleuedd cynhenid y lliw. Mae hyn yn ei gwneud hi'n hawdd gwahaniaethu rhwng fflworoleuedd penodol ar y sbesimen ac awtofflworoleuedd y meinwe cefndir.
Dull cyffroi BV: Mae cyffro yn cael ei wneud gyda golau sy'n amrywio o uwchfioled i olau glas, wedi'i ganoli ar 404 nm a 434 nm. Gan fod golau glas yn arbelydru'r sbesimen yn y dull hwn, rhaid i hidlydd torri'r system arsylwi fflworoleuedd rwystro golau glas yn llwyr wrth drosglwyddo'r fflworoleuedd gwyrdd a melyn gofynnol yn llawn. Mae'r dull hwn yn cael ei gymhwyso i fflworocromau a ddefnyddir mewn technegau gwrthgyrff fflwroleuol. Mae tonfedd amsugno uchaf y golau excitation a thonfedd allyriadau uchaf y fflworoleuedd yn gymharol agos, felly mae angen hidlwyr miniog ar gyfer cyffro BV. Defnyddir golau glas fel golau excitation yma, sy'n dod ag effeithlonrwydd amsugno uchel o fflworocromau ac yn cynhyrchu delweddau mwy disglair. Yr anfantais yw na ellir canfod fflworoleuedd o dan 500 nm, ac mae signalau uwch na 500 nm yn rhoi arlliw melyn i'r ddelwedd gyfan. Mewn profion gwrthgyrff fflwroleuol, mae penodoldeb yn cael ei farnu'n bennaf gan liw nodweddiadol y fflworocrom. Felly, wrth werthuso penodoldeb cynnil, gall yr anfantais uchod o'r dull excitation BV gael effaith sylweddol.
