Technegau staenio ac arsylwi microsgopig o ficro-organebau
1. Pwrpas
1.1 Dysgu technegau sylfaenol taeniad microbaidd a staenio.
1.2 Meistroli'r dull staenio syml o facteria.
1.3 Deall nodweddion morffolegol bacteria yn gyntaf, a chyfnerthu'r wybodaeth am sut i ddefnyddio lensys olew a thechnegau gweithredu aseptig.
2 Egwyddorion
Mae taenu a staenio bacteria yn dechneg sylfaenol mewn arbrofion microbioleg. Mae celloedd bacteriol yn fach ac yn dryloyw, gan eu gwneud yn anodd eu hadnabod o dan ficrosgop golau cyffredin; rhaid eu staenio. Defnyddir un llifyn i liwio bacteria, fel bod y bacteria lliw yn ffurfio gwahaniaeth lliw clir o'r cefndir, fel y gellir gweld eu morffoleg a'u strwythur yn gliriach. Mae'r dull hwn yn hawdd i'w weithredu ac yn addas ar gyfer arsylwi siâp cyffredinol celloedd bacteriol a threfniant bacteria. Defnyddir lliwiau sylfaenol yn gyffredin ar gyfer staenio syml. Mae hyn oherwydd mewn atebion niwtral, alcalïaidd neu asidig gwan, mae celloedd bacteriol fel arfer yn cael eu gwefru'n negyddol, a phan fydd llifynnau sylfaenol yn cael eu ïoneiddio, mae rhan lliwio eu moleciwlau yn cael ei wefru'n bositif, felly maent yn alcalïaidd. Mae rhan staenio'r llifyn yn cyfuno'n hawdd â bacteria i'w lliwio. Mae'r celloedd bacteriol lliw yn cyferbynnu'n fawr â'r cefndir, gan eu gwneud yn haws i'w hadnabod o dan ficrosgop. Mae lliwiau a ddefnyddir yn gyffredin ar gyfer lliwio syml yn cynnwys methylene glas, fioled grisial, fuchsin sylfaenol, ac ati Pan fydd bacteria yn dadelfennu siwgrau ac yn cynhyrchu asid, gan achosi i pH y cyfrwng diwylliant ostwng, mae'r tâl positif ar y bacteria yn cynyddu. Ar yr adeg hon, gellir defnyddio llifynnau asidig fel eosin, fuchsin asid, neu goch Congo ar gyfer staenio. Rhaid trwsio bacteria cyn staenio. Mae ganddo ddau ddiben: un yw lladd bacteria a gwneud iddynt gadw at y sleid gwydr; y llall yw cynyddu eu perthynas â lliwiau. Dau ddull a ddefnyddir yn gyffredin yw gwresogi a gosod cemegol. Wrth osod, ceisiwch gadw siâp gwreiddiol y celloedd.
3 deunydd
3.1 Bacteria: Bacillus subtilis 12-18h diwylliant gogwydd agar maeth, Staphylococcus aureus 24h diwylliant gogwydd maeth agar, Escherichia coli 24h diwylliant gogwydd agar maethol, diwylliant gogwydd agar burum pobydd.
3.2 Asiant lliwio: llifyn glas methylene alcalïaidd Lu (neu liw fioled grisial amoniwm oxalate), llifyn fuchsin asid carbolig.
3.3 Offerynnau neu offer eraill: microsgop, lamp alcohol, sleid, dolen frechu, rac sleidiau, potel haen ddwbl (yn cynnwys olew cedrwydd a xylene), meinwe lens, saline ffisiolegol neu ddŵr distyll, ac ati.
4. Proses: ceg y groth → sychu → sefydlogi → staenio → golchi → sychu → archwiliad microsgopig.
5 cam
5.1 Ceg y groth: Cymerwch ddwy sleid wydr lân a di-olew. O dan amodau di-haint, rhowch ddiferyn bach o halwynog arferol (neu ddŵr distyll) ar bob canolfan o'r sleid gwydr. Defnyddiwch ddolen frechu i sterileiddio'r bacteria o Bacillus subtilis. , Micrococcus luteus ac Escherichia coli, dewiswch ychydig o lawnt bacteriol yn y defnynnau dŵr ar y gogwydd, cymysgwch yn dda a'i gymhwyso i mewn i ffilm denau. Os ydych chi'n defnyddio ceg y groth ataliad bacteriol (neu ddiwylliant hylif), gallwch ddefnyddio dolen frechu i ddewis 2 i 3 dolen a'u cymhwyso'n uniongyrchol ar y sleid. Byddwch yn ofalus i beidio â gollwng gormod o halwynog ffisiolegol (dŵr distyll) a chael gwared ar facteria a'i gymhwyso'n gyfartal ac nid yn rhy drwchus.
5.2 Sychu Sychwch yn naturiol ar dymheredd ystafell. Gallwch hefyd ei gynhesu ychydig dros lamp alcohol gyda'r ochr gorchuddio yn wynebu i'w sychu. Ond gwnewch yn siŵr nad ydych chi'n mynd yn rhy agos at y fflam, oherwydd bydd tymheredd rhy uchel yn dinistrio morffoleg y bacteria.
5.3 Gosodiad Os defnyddir sychu wedi'i gynhesu, cyfunir gosod a sychu yn un cam, ac mae'r dull yr un fath â sychu. Ceg y groth, sych a gwres-atgyweiria.
5.4 Lliwio: Rhowch y sleid yn fflat ar y rac sleidiau, ac ychwanegwch 1 i 2 ddiferyn o hydoddiant lliw ar y ceg y groth (mae'n briodol i'r hydoddiant llifyn orchuddio'r ffilm ceg y groth yn unig). Stain gyda glas methylene sylfaenol Lu am 1 i 2 funud, a staen gyda fuchsin asid carbolic (neu fioled grisial amoniwm oxalate) am tua 1 munud.
5.5 Golchi â dŵr: Arllwyswch yr hydoddiant llifyn a rinsiwch yn ysgafn â dŵr tap o un pen i'r llithren nes bod y dŵr sy'n rhedeg i lawr o'r ceg y groth yn ddi-liw. Wrth olchi â dŵr, peidiwch â golchi'r wyneb gorchuddio yn uniongyrchol â dŵr. Ni ddylai llif y dŵr fod yn rhy gyflym nac yn rhy fawr i atal y ffilm ceg y groth rhag cwympo.
5.6 Sychu: Ysgwydwch y diferion dŵr ar y sleid a'u sychu'n naturiol, chwythu'n sych gyda sychwr gwallt neu ei amsugno â phapur amsugnol (byddwch yn ofalus i beidio â sychu'r bacteria). 5.7 Archwiliad microsgopig Ar ôl i'r ceg y groth fod yn sych, gwnewch archwiliad microsgopig. Rhaid i'r ceg y groth fod yn hollol sych cyn edrych arno gyda lens olew.
6 Canlyniadau Lluniwch forffoleg E. coli a Micrococcus luteus a welwyd ar ôl staenio sengl.
