Y gwahaniaeth rhwng microsgop fflwroleuedd (dau ffoton, confocal) a microsgop cyffredin
Egwyddor sylfaenol cyffro dau ffoton yw y gall moleciwlau fflwroleuol amsugno dau ffoton tonfedd hir ar yr un pryd ac allyrru ffoton tonfedd fyrrach ar ôl cyfnod byr o oes gyffrous fel y'i gelwir; Mae'r effaith yr un peth â defnyddio ffoton gyda hanner tonfedd y donfedd hir i gyffroi moleciwlau fflwroleuol. Mae dau gyffro ffoton yn gofyn am ddwysedd ffoton uchel, ac er mwyn osgoi niweidio celloedd, mae microsgopeg dau ffoton yn defnyddio laserau pwls ynni uchel wedi'u cloi ynni. Mae gan y laser a allyrrir gan y laser hwn egni brig uchel ac egni cyfartalog isel, gyda lled pwls o ddim ond 100 femtosecondau ac amledd o hyd at 80 i 100 megahertz. Wrth ddefnyddio lens gwrthrychol rhifiadol uchel i ganolbwyntio ffotonau laser pylsog, dwysedd y ffoton ar ganolbwynt y lens gwrthrychol yw'r uchaf, ac mae cyffro dau ffoton yn digwydd ar ganolbwynt y lens amcan yn unig. Felly, nid oes angen twll pin confocal ar y microsgop dau ffoton, sy'n gwella effeithlonrwydd canfod fflwroleuedd.
Yn gyffredinol ffenomenau fflwroleuedd, oherwydd dwysedd ffoton isel y golau cyffroi, dim ond un ffoton y gall moleciwl fflwroleuol ei amsugno ar y tro ac yna allyrru ffoton fflwroleuol arall trwy drosglwyddo pelydrol, a elwir yn fflwroleuedd ffoton sengl. Ar gyfer prosesau cyffroi fflwroleuedd gan ddefnyddio laserau fel ffynonellau golau, gall ffenomenau fflwroleuedd dau ffoton neu hyd yn oed aml-ffoton ddigwydd. Yn yr achos hwn, mae gan y ffynhonnell golau cyffroi a ddefnyddir ddwysedd uchel a dwysedd ffoton sy'n cwrdd â'r gofyniad i foleciwlau fflwroleuol amsugno dau ffoton ar yr un pryd. Yn y broses o ddefnyddio laser cyffredinol fel y ffynhonnell golau cyffroi, mae dwysedd y ffoton yn dal i fod yn ddigonol i gynhyrchu ffenomen amsugno dau ffoton. Yn nodweddiadol, defnyddir laserau pwls femtosecond, gyda phŵer ar unwaith yn cyrraedd y lefel megawat. Felly, mae tonfedd fflwroleuedd dau ffoton yn fyrrach na golau cyffroi, sy'n cyfateb i'r effaith a gynhyrchir gan hanner cyffro tonfedd cyffroi.
Gwybodaeth yn ymwneud â microsgopeg fflwroleuedd confocal
Egwyddor sylfaenol microsgopeg fflwroleuedd confocal yw defnyddio ffynhonnell golau pwynt i arbelydru'r sbesimen, gan ffurfio man golau bach wedi'i ddiffinio'n dda ar yr awyren ffocal. Mae'r fflwroleuedd a allyrrir o'r fan hon ar ôl arbelydru yn cael ei gasglu gan y lens gwrthrychol a'i anfon yn ôl ar hyd y llwybr arbelydru gwreiddiol i'r holltwr trawst sy'n cynnwys drych dichroig. Mae'r sbectromedr yn anfon fflwroleuedd yn uniongyrchol i'r synhwyrydd. Mae twll pin o flaen y ffynhonnell golau a'r synhwyrydd, o'r enw'r twll pin goleuo a'r twll pin canfod, yn y drefn honno. Mae dimensiynau geometrig y ddau yn gyson, oddeutu 100-200 nm; O'i gymharu â'r man ysgafn ar yr awyren ffocal, mae'r ddau yn gyfun, sy'n golygu bod y smotyn golau yn mynd trwy gyfres o lensys ac yn y pen draw yn gallu canolbwyntio ar y twll pin goleuo a'r twll pin canfod ar yr un pryd. Yn y modd hwn, gall golau o'r awyren ffocal gydgyfeirio o fewn ystod y twll canfod, tra bod golau gwasgaredig o uchod neu islaw'r awyren ffocal wedi'i rwystro y tu allan i'r twll canfod ac ni ellir ei ddelweddu. Mae sganio'r pwynt sampl wrth bwynt gyda laser, mae'r tiwb ffotomultiplier ar ôl canfod y twll pin hefyd yn cael y ddelwedd gonfocal gyfatebol o'r man sbot ysgafn fesul pwynt, yn ei droi'n signal digidol ac yn ei drosglwyddo i'r cyfrifiadur, ac yn olaf yn ei agregu i ddelwedd gonfocal glir o'r awyren ffocal gyfan ar y sgrin.
