Mae gan ficrosgopeg fflworoleuedd dau ffoton lawer o fanteision:
1) Mae gwasgariad yn effeithio llai ar donfeddi golau hirach na thonfeddi golau byrrach i dreiddio i'r sbesimen;
(2) Nid yw moleciwlau fflwroleuol y tu allan i'r awyren ffocal yn gyffrous fel y gall mwy o olau cyffro gyrraedd yr awyren ffocal, fel y gall y golau excitation dreiddio'n ddyfnach i'r sbesimen;
3) Mae tonfeddi hirach o olau bron isgoch yn llai gwenwynig i gelloedd na thonfeddi byrrach;
4) Wrth ddefnyddio microsgop dau ffoton i arsylwi sbesimen, dim ond yn yr awyren ffocal y mae ffotobleaching a ffotowenwyndra yn bresennol. Felly, mae microsgopau dau ffoton yn fwy addas na microsgopau un ffoton ar gyfer arsylwi sbesimenau trwchus, ar gyfer arsylwi celloedd byw, neu ar gyfer cynnal arbrofion ffotobleaching sbot.
Gwybodaeth microsgop fflworoleuedd cydffocal
Egwyddor sylfaenol microsgop fflworoleuedd confocal: defnyddir ffynhonnell golau pwynt i arbelydru'r sbesimen, gan ffurfio pwynt golau bach, wedi'i ddiffinio'n dda ar yr awyren ffocal. Mae'r fflworoleuedd a allyrrir o'r pwynt hwn ar ôl arbelydru yn cael ei gasglu gan y lens gwrthrychol a'i anfon yn ôl i'r trawstiau sy'n cynnwys drych cromatig deugyfeiriadol ar hyd y llwybr golau arbelydru gwreiddiol. Mae'r holltwr trawst yn anfon y fflworoleuedd yn uniongyrchol i'r synhwyrydd. Mae gan y ffynhonnell golau a'r synhwyrydd dwll pin o'u blaenau, a elwir yn dwll pin goleuo a'r twll pin canfod, yn y drefn honno. Mae gan y ddau yr un geometreg, tua 100-200 nm, ac maent yn gyfun o ran y pwynt golau ar y plân ffocal, hy, mae'r pwynt golau yn mynd trwy gyfres o lensys a gellir canolbwyntio yn y pen draw ar y goleuo a thyllau pin canfod. Yn y modd hwn, gall golau o'r awyren ffocal gydgyfeirio o fewn agorfa'r stiliwr, tra bod golau gwasgaredig uwchben neu o dan y plân ffocal wedi'i rwystro y tu allan i agorfa'r stiliwr ac ni ellir ei ddelweddu. Mae'r laser yn sganio'r sampl fesul pwynt, ac mae'r tiwb ffotomultiplier ar ôl canfod y twll pin hefyd yn cael delwedd gydffocal y pwynt golau cyfatebol fesul pwynt, sy'n cael ei drawsnewid yn signal digidol a'i drosglwyddo i'r cyfrifiadur, ac yn olaf yn cydgyfeirio i mewn i glir. delwedd gydffocal o'r awyren ffocal gyfan ar y sgrin.
Mae pob delwedd awyren ffocal mewn gwirionedd yn drawstoriad optegol o'r sbesimen, ac mae gan y trawstoriad optegol hwn drwch penodol bob amser, a elwir hefyd yn ddalen optegol. Gan fod dwyster y golau yn y canolbwynt yn llawer mwy na'r hyn sydd ar y pwynt di-ffocws, a bod y golau awyren di-ffocws yn cael ei hidlo allan gan y twll pin, mae dyfnder maes y system gydffocal yn fras i fod yn sero, a sganio ar hyd cyfeiriad echel Z yn galluogi tomograffeg optegol i ffurfio tafell optegol dau-ddimensiwn o'r sbesimen i'w arsylwi yn y man ffocws. Gan gyfuno sganio awyren XY (awyren ffocal) â sganio echel Z (echel optegol), gellir cael delwedd tri dimensiwn o'r sampl trwy gronni haenau olynol o ddelweddau dau ddimensiwn, sy'n cael eu prosesu gan feddalwedd cyfrifiadurol arbenigol.
Mae hyn yn golygu bod y twll pin canfod a'r twll pin ffynhonnell golau bob amser yn canolbwyntio ar yr un pwynt, fel na all fflworoleuedd cyffroi y tu allan i'r awyren ffocal fynd i mewn i'r twll pin canfod.
Mynegir egwyddor weithredol confocal laser yn syml ei fod yn defnyddio laser fel ffynhonnell golau, ar sail delweddu microsgop fflworoleuedd traddodiadol, dyfais sganio laser ychwanegol a dyfais canolbwyntio cyfun, trwy reolaeth gyfrifiadurol i gyflawni system caffael a phrosesu delwedd ddigidol.
